本生快訊| ELISA實驗標本應如何采集、處理及保存?

　　ELISA作為免疫學，能及時和經濟地測定和量化樣品中的抗原或抗體，被視為生物樣品定量檢測的金標準。為了獲取最準確的實驗結果，應盡可能消除其他類因素帶來的誤差和影響，因此需要參照各類不同樣本的處理和保存辦法進行實驗前準備 。BUNSEN本生本文將為大家準備了一份ELISA樣本收集/保存/運輸的相關資料。

　　ELISA進行臨床檢驗常見的樣本一般包括血清、血漿、尿液、糞便、細胞、動物組織、植物組織、胸腹水、腦脊液、肺泡灌洗液等，這些樣本的收集、處理的方法和保存都有一定的要求，如果處理不當，會直接影響到之后的正式試驗。

　　一、樣本的收集及處理方法

　　1、血清

　　干燥管(黃色)或促凝管(紅色)收集全血，室溫自然凝固10-20min，離心5-10min(2500-3500rpm)。采血過程中應避免溶血，仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心;

　　注意事項：根據自身實驗需要，取適量上清液可進行ELISA測定。 請注意指標說明書上對于抗凝血劑是否有特殊要求，如有特殊要求，需按照說明書提示進行操作，建議使用EDTA。血漿中除含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成分均與血清相同。制備血漿標本需借助于抗凝劑EDTA，因為抗凝不的標本會因纖維蛋白原干擾實驗而造成假陽性。

　　2.血漿

　　抗凝管(紫色、黑色、綠色)收集全血，采集后馬上混勻，靜置10min左右，離心5-10min(2500-3500rpm)。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心;

　　3.尿液

　　用無菌管收集，離心10-20min(2500-3500rpm)，仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心;

　　4.糞便

　　用無菌 15ml 離心管收集, 1g 樣本+9ml PBS(0.01M，pH=7.4)，充分勻漿完離心5-10min(2500-3500rpm/min)，取上清備用;

　　5. 細胞

　　檢 測 分 泌 性 的 成 份 ： 用 無 菌 管 收 集 ， 5-10min(2500-3500rpm)，仔細收集上清;

　　細胞內指標：吸去培養(yǎng)板內的培養(yǎng)基，胰酶消化細胞，收集細胞沉淀，PBS(0.01M，PH=7.4)清洗一次，PBS 稀釋細胞懸液，細胞濃度達到 1×106個/ml 左右，充分研磨后超聲裂解(用超聲細胞破碎儀，300W功率，每次超聲3～5秒，間隔30秒，重復4～5次)，或反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份，離心5-10min(2500-3500rpm)，取上清備用;

　　6.動物組織

　　用無菌 15ml 離心管收集, 組織重量不能低于 50mg，1g 組織加入 9ml PBS(0.01M，PH=7.4)，手工或勻漿器將標本勻漿充分，勻漿過程中，PBS 分 2 次加進去，這樣勻漿更充分。充分勻漿完離心 5-10min(2500-3500rpm/min)。取上清備用(切勿加入細胞裂解液);

　　7.植物組織

　　用無菌15ml離心管收集, 組織重量不能低于 50mg，1g 組織加入 9ml PBS(0.01M，PH=7.4)，手工或勻漿器將標本勻漿充分，勻漿過程中，PBS 分 2 次加進去，這樣勻漿更充分。充分勻漿完離心 5-10min(2500-3500rpm)。取上清備用(切勿加入細胞裂解液);

　　8.牛奶

　　8000rpm 高速離心，離心后分三層，層是脂肪層，中間層是乳清，底層是固態(tài)蛋白，取中間層保存?zhèn)溆?。乳清量參照血清量;

　　9.胸腹水、腦脊液、肺泡灌洗液

　　處理方法同尿液。

　　注意事項

　　1)不能檢測含NaN?的樣品，因NaN? 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性;

　　2)收集血液應避免產生溶血現象。紅細胞破碎，釋放大量的過氧化物酶，會影響ELISA檢測中的辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AP)的酶促反應，造成檢測結果的不確定性;

　　3)在檢測前，冷凍過的樣本應緩慢地融化并離心除去凍融過程產生的沉淀物，室溫混勻后使用;

　　4)若使用化學裂解液制備組織勻漿或細胞提取液，由于引入某些化學物質會導致ELISA測值出現偏差;

　　5)對于組織勻漿、組織全蛋白、細胞提取液等蛋白提取樣本，經BCA法測定樣本蛋白含量后，建議進行蛋白濃度的統一化，避免因組織重量、細胞數、產物體積等因素造成的人為誤差。

　　二、樣本的保存與運輸

　　保存

　　樣品收集后若在1周內進行檢測可保存于2-8℃，若不能及時檢測，請按一次使用量分裝，凍存于-20℃或-80℃，避免反復凍融。

　　運輸

　　使用冰袋或干冰運輸，確保運輸到達里面的冰袋或干冰未融化，運輸時間應盡量短。

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